饮用水源水中"两虫"检测方法及其健康风险评价研究
贾第鞭毛虫和隐孢子虫(简称"两虫")是两类人兽公患的肠道寄生原虫，两虫染色试剂销售，通常呈现水源性暴发，受到国际上的广泛关注.目前"两虫"检测方法常用步骤为过滤，分离纯化，染色，镜检.其中过滤存在工作量大，成本较高，江苏两虫染色试剂，回收率不稳定等缺陷.本研究在简单易行的沉淀法基础上，建立了碳酸钙沉淀—密度梯度离心纯化的"两虫"检测方法.通过对某市开放式河网自来水厂的原水"两虫"的调查及检测，两虫染色试剂厂家，研究其健康风险.主要研究成果如下: (1)碳酸钙沉淀法能够有效地浓缩富集饮用水源水中"两虫".采用法分别对沉淀后的上清液和沉淀中的"两虫"数量进行了检测分析.在pH=10，投加碳酸氢钠，氯化钙反应1h并静置12h的条件下，上清液中贾第鞭毛虫孢囊和隐孢子虫卵囊的平均检出率分别为1.2%，1.1%，"两虫"富集效率可达到98%以上. (2)在碳酸钙沉淀法基础上，对比研究了Percoll-蔗糖密度梯度离心及磁珠法的分离纯化效率，两者对于贾第鞭毛虫孢囊的平均回收率分别为72.3%和59.1%，而对于隐孢子虫卵囊的平均回收率分别为39.5%和52.2%，均满足美国环保局EPA的规定范围;Percoll-蔗糖密度梯度离心法对于贾第鞭毛虫孢囊具有更好的分离效率，而且其分析成本更低. (3)针对某市开放式河网的原水采样调查，采用碳酸钙沉淀/Percoll-蔗糖密度梯度离心的分析方法检测，发现10L水源水中有0-4个贾第鞭毛虫孢囊和0-13个隐孢子虫卵囊.通过剂量-效应指数模型对隐孢子虫潜在风险进行评价可知，常规处理和深度处理后出厂水中隐孢子虫的风险值分别为3.71×10-6和3.71×10-8，远低于美国所接收的高风险限值10-4，这表明在现有饮用水源水水质和处理工艺条件下，出水安全可以得到保障.
水中检测“两虫”的意义
水中检测“两虫”的意义
对贾第鞭毛虫和隐孢子虫项目检测方法采用国家《生活饮用水标准检验方法》（GB/T 5750.12-2006）中规定的“磁分离荧光法”，系列“两虫”检测设备都是进口。由于国内对“两虫”检测研究起步较晚，“两虫”标样、磁分离、荧光试剂等都需进口，大大小小配套仪器有十几台，都需手工操作，操作过程极其繁锁、且要十分细心。检测“两虫”主要有以下步骤：过滤采样——淘洗浓缩——IMS磁分离——IFA染色——显微镜检，才能到“两虫”的孢囊和卵囊。因水样中的卵囊数量较少，因此需要浓缩较大体积的水样，原水需要20L，处理后的出厂水（管网水）需要100L。在这么多的水量中 “两虫”的孢囊和卵囊，操作难度大大增加。
首先要进行接种和样品的淘洗和浓缩，然后开始离心。
a. 两虫检测离心机应放在牢固的工作台或地板上，尽量减少晃动。
b. 平衡对称的离心管，和适配器、离心桶一起平衡，重量差别不超过0.5g，两虫染色试剂专卖， 尽量减少摆动。注意：如果离心管不被平衡则会产生额外的震动，影响到目标物的沉淀。
c. 设置离心机参数2000g，15min。样品在离心机中自然惯性停止，不可使用刹车系统急停。
d.用真空泵或蠕动泵吸取离心管中的上清液，在进口处装一个移液器以减少进口的真空力度。终留取5-8ml（可预先在管上做好标记）。流速控制在200±20ml/min。注意把移液管放到液面中心，接近液面处上吸取上清液，以减少沉淀的损失。
e. 将离心管中的剩余的浓缩液在涡旋混合器上混匀20秒。
f. 用缓冲液润洗移液器将所有液体转移至L型试管中。（注意：移液器需要用缓冲液润洗下，是为了避免移液管壁因干燥而将两虫挂壁。）
g. 使用纯水清洗两次移液管（如剩余体积为7ml，则每次1.5ml），并将清洗 液移入同一个L型试管中，每次冲洗后都要停留20秒再移出液体。
两虫检测离心机离心和移液结束后，再进行两虫的捕获和染色，然后分析检验的结果就可以判断两虫的情况了。
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