每批试剂需做验证检验：向一份100mL无菌水样中接种含有粪大肠菌的质控样标准菌株，按照上述定量检测步骤操作观察结果，看结果是否在其范围内。
9 注意事项
9.1 如果水样品有背景颜色，需做一个空白试验，总大肠检测试剂，与标准检测结果相比较。
9.2 只可使用灭菌水，不含缓冲液的水，不含氧化剂的水进行样品稀释。
9.3 此法所用试剂只用于常规水样，不可用于浓缩水样。
9.4 如水样中含有过多的氯，则加入试剂可能显蓝光，则该水样不可用此方法。
9.5 此法无需在无菌室中进行，但操作过程因避免微生物污染。
9.6 检测使用过的定量盘应灭菌后弃去。把约30个定量盘放入防爆袋中，用绳子松松的扎住袋口，放入高压蒸汽灭菌锅中，121℃高压灭菌20min后取出，在防爆袋上注明“生物垃圾已灭菌”方可弃去。
大肠实验步骤
大肠实验步骤(—)培养基1、普通乳糖蛋白胨培养液亚硫酸钠培养基（供平板分离用）蛋白胨 10g， 乳糖 10g，贵州检测试剂，K2HPO4 3.5g，琼脂 15～20g，蒸馏水1000mL，无水亚硫酸钠 5g，5％的碱性品红乙醇溶液 20mL，pH 7.2~7.4。4、培养基（EMB培养基）（供发酵法平板分离用，3和4可任选一种）蛋白胨10g，大肠菌群检测试剂，乳糖10g，K2HPO4 2.0g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，2％伊红（曙红）水溶液 20mL，5％美蓝（亚甲蓝）水溶液13mL，pH 7.2~7.4。(二)灭菌移液管、灭菌稀释水、试管、杜汉氏小管、革兰氏染色液、灭菌培养皿。(一)水样的采集供细菌学检验的水样，必须按一般无菌操作的基本要求采集，并保证再运送、贮存过程中不受污染。水样从采集到检验不应超过4h ，在0～4℃下保存不应超过24h ，如不能在4h 内分析，应在检验报告上注明保存时间和条件。1、自来水取样：应在水打开放水5min ，大肠检测试剂，再用无菌容器接取水样，待分析。如水样内含有余氯，则采样瓶灭菌后按每500mL水样加3％Na2S2O3.5H2O溶液1mL。2、江、河、湖、池自然水体取样：可用采样器，采样瓶应先灭菌。采样后，瓶内应留有空隙。如果与其他化验项目联合取样，细菌学分析水样应采在其他样品之前。
酶底物法测定用途：用于检测水中总大肠菌群、粪大肠菌群（耐热大肠菌群）和大肠埃希氏菌。可用于检测水的类型：饮用水、水源水、废水、食品水、地表水、地下水、海水、瓶装水、中水、二次供水、管网水、畜牧用水、用水等。 符合《生活饮用水标准GB5749－2006》及《生活饮用水标准检验方法GB/T5750.12－2006》； 符合WHO，美国EPA，Standard Method，韩国，日本，新加坡，欧盟等60多个guojia和组织的标准检测方法。； 符合CJ/T206—2005城市供水水质标准； 符合GB3838-2002，地表水环境质量标准； 符合GB/T 14848-93地下水质量标准符合GB 9667-1996，游泳场所卫生标准。
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